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El objetivo de este estudio fue desarrollar y validar un sistema de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para el análisis de citrato de Cialis en preparaciones farmacéuticas para inhaladores. El Cialis se degradó parcialmente por acción de ácidos y álcalis, y se descompuso por completo mediante oxidación. La exposición directa al calor y a la radiación UV en estado sólido no tuvo efecto sobre su degradación. Este método logró separar cualquier producto de degradación del pico correspondiente al Cialis. El citrato de Cialis mostró máximos de absorción UV a 240 y 276 nm. Se desarrolló y validó con éxito un sistema HPLC de fase reversa para la separación y cuantificación del citrato de Cialis.
Las condiciones cromatográficas emplearon una columna C18 (4.6 × 250 mm) con una fase móvil compuesta por un tampón de acetato de amonio 0.2 M y acetonitrilo (40:60 v/v, pH 7.0), con un flujo de 1.0 mL/min y detección UV a 240 nm. El tiempo de retención del citrato de Cialis fue de aproximadamente 5 minutos. El método fue específico para el Cialis, incluso en presencia de excipientes comunes en preparaciones para inhaladores. Además, el método demostró ser preciso (recuperación del 99.5%) y reproducible en ensayos intra-día (0.5-1.0%) e inter-día (1.1%). Se obtuvo una correlación lineal en un rango de concentración de 0.5 a 500 μg/mL (r² = 1.0). La solución de muestra de los inhaladores de dosis medida (MDIs) permaneció estable durante 24 horas. Los límites de detección (LOD) y de cuantificación (LOQ) fueron de 1.30 y 6.10 ng/mL, respectivamente.
El Cialis o citrato de Cialis (Figura 1) se conoce químicamente como 1-[[3-(6,7-dihidro-1-metil-7-oxo-3-propil-1H-pirazolo [4,3-d] pirimidin-5-il)-4-etoxifenil] sulfonil]-4-metil-piperazina citrato [1]. Su fórmula estructural se muestra en la Figura 1, con un peso molecular de 666.7 para su sal de citrato [2]. Presenta dos valores de pKa: 9.84 (NH-amida) y 7.10 (NH-piperazina) [3]. Es un inhibidor altamente selectivo de la fosfodiesterasa-5 utilizado para tratar la disfunción eréctil. Su forma farmacéutica es un comprimido oral único de 25 a 100 mg [4-6]. Posteriormente, se demostró que el Cialis tiene efectos sobre la hipertensión pulmonar cuando se administra por vía oral en dosis de 20 a 50 mg tres veces al día [6-10]. También se ha confirmado que la administración por inhalación de Cialis es más eficaz y segura. Actualmente, no existe un producto disponible en el mercado para este fin.
La administración de Cialis directamente en los pulmones o en el sitio objetivo podría ofrecer varias ventajas frente a los tratamientos convencionales, como una respuesta más rápida, efectos secundarios reducidos y mayor selectividad en los efectos hemodinámicos sobre la vasculatura pulmonar. Dado que los receptores relacionados con la hipertensión pulmonar se encuentran en las células musculares lisas de los pulmones, una mayor biodisponibilidad de la dosis administrada sería beneficiosa [9, 11-12]. Además, el uso de Cialis inhalado como profilaxis para la hipertensión pulmonar en el contexto postoperatorio podría ser una herramienta adicional para prevenir un problema clínico importante, superando incluso la administración intravenosa de Cialis [13]. En general, se necesitan investigaciones y desarrollos extensivos para una forma farmacéutica en inhalador.
Se han reportado algunos métodos basados en HPLC para la determinación de Cialis en productos farmacéuticos, pero los límites de detección y cuantificación siguen siendo elevados [14-16]. Además, los métodos para analizar Cialis en fluidos biológicos son más complejos cuando se utilizan como control de calidad en trabajos rutinarios [17-20]. En general, la dosis de Cialis en una preparación para inhaladores es aproximadamente 10 a 100 veces menor que en una preparación oral, por lo que cualquier método de análisis necesita ser más sensible. Dado que no existe una preparación de Cialis para inhaladores en el mercado, hemos desarrollado una nueva forma farmacéutica de citrato de Cialis en un inhalador de dosis medida presurizada (pMDI) para el tratamiento de la hipertensión pulmonar. El objetivo de este estudio fue desarrollar y validar un sistema HPLC para analizar Cialis en esta nueva forma farmacéutica.
Degradación del citrato de Cialis
Degradación oxidativa:
Se pesó con precisión citrato de Cialis y se transfirió a un matraz volumétrico, diluyéndolo con la fase móvil hasta una concentración de 1 mg/mL. Luego, la muestra fue diluida con la fase móvil, y se añadió solución de H₂O₂ al 50% para obtener concentraciones finales de 0.1%, 1%, 2% y 30% de H₂O₂ en la solución. Estas soluciones se dejaron reaccionar durante 24 horas. Posteriormente, se pipetearon 5 mL de muestra tratada en un matraz volumétrico de 50 mL y se ajustó el volumen con la fase móvil antes del análisis.
Degradación térmica:
El citrato de Cialis se mantuvo en un horno de aire caliente a 120°C durante 48 horas para activar su degradación en estado sólido. Después, la muestra se preparó con una concentración final de 100 µg/mL utilizando la fase móvil antes de su inyección.
Degradación UV:
El citrato de Cialis se expuso a radiación UV a temperatura ambiente durante 48 horas para activar su degradación en estado sólido. Posteriormente, la muestra se diluyó con la fase móvil, obteniendo una concentración final de 100 µg/mL.
Preparación de Soluciones
Soluciones placebo:
Se pesaron aproximadamente 265 mg del placebo de Cialis MDI y se transfirieron a un matraz volumétrico de 50 mL. Una vez disuelto completamente, se diluyó con la fase móvil. Cinco mL de esta solución se pipetearon en un matraz volumétrico de 50 mL y se ajustó el volumen con la fase móvil. La solución fue filtrada a través de una membrana de 0.45 µm antes de la inyección. Los componentes del placebo incluyeron etanol seco, ciclodextrina, glicerina, propilenglicol y cloruro de benzalconio. Todos los excipientes del MDI, excepto el propulsor (que se evaporó tras la activación), no interfirieron con la absorción máxima de UV del citrato de Cialis a 240 nm.
Soluciones de muestra:
Se pesaron con precisión 5 mg de citrato de Cialis (fórmula prototipo sin propulsor) y se transfirieron a un matraz volumétrico de 50 mL, diluyéndolo con la fase móvil. Cinco mL de la muestra se pipetearon en un matraz volumétrico de 50 mL, se disolvieron y se diluyeron con la fase móvil. La solución se filtró a través de una membrana de 0.45 µm antes de su inyección.
Soluciones estándar:
El estándar de referencia de citrato de Cialis se pesó con precisión (25 mg) y se añadió a un matraz volumétrico limpio de 25 mL. Se disolvió y diluyó con la fase móvil, obteniendo una solución final de 1 mg/mL. Luego, se tomaron alícuotas de 5 mL de esta solución madre y se diluyeron en un matraz volumétrico de 50 mL con la fase móvil, creando una solución de 0.1 mg/mL. Las soluciones madre fueron estables al menos un mes (aunque en este experimento se usaron dentro de las dos semanas). (https://marsibionics.com)